PCR、qPCR與dPCR技術(shù)對(duì)比

　　PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))、qPCR(熒光定量PCR)和dPCR(數(shù)字PCR)是分子診斷中常用的核酸擴(kuò)增技術(shù)，三者核心差異在于檢測(cè)原理、定量能力及應(yīng)用場(chǎng)景。

　　1. 原理與檢測(cè)方式?

　　普通PCR?：

　　通過變性、退火、延伸循環(huán)擴(kuò)增目標(biāo)DNA，終點(diǎn)通過電泳定性分析產(chǎn)物?。

　　僅能判斷目標(biāo)序列“有無(wú)"，無(wú)法定量?。

　　qPCR(熒光定量PCR)?：

　　在PCR體系中加入熒光染料或探針，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程，通過Ct值(閾值循環(huán)數(shù))定量初始模板量?。

　　可區(qū)分絕對(duì)定量(需標(biāo)準(zhǔn)曲線)和相對(duì)定量(如基因表達(dá)分析)?。

　　dPCR(數(shù)字PCR)?：

　　將樣本分割為微滴或微孔，獨(dú)立擴(kuò)增后統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性/陰性比例，直接計(jì)算絕對(duì)拷貝數(shù)，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線?。

　　2. 定量能力與靈敏度?

　　技術(shù) 定量范圍 靈敏度 適用場(chǎng)景

　　PCR 定性/半定量 低(依賴電泳) 基因克隆、病原體初篩?

　　qPCR 相對(duì)/絕對(duì)定量 高(Ct值) 基因表達(dá)、病原體定量?

　　dPCR 絕對(duì)定量 高(單分子) 稀有突變檢測(cè)、低豐度樣本?

　　3. 優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比?

　　PCR?：

　　優(yōu)點(diǎn)：成本低、操作簡(jiǎn)單。

　　缺點(diǎn)：無(wú)法定量，易污染(需開蓋檢測(cè))?。

　　qPCR?：

　　優(yōu)點(diǎn)：實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、自動(dòng)化高、靈敏度好?。

　　缺點(diǎn)：依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線，擴(kuò)增效率影響準(zhǔn)確性?。

　　dPCR?：

　　優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)曲線，抗抑制劑能力強(qiáng)?。

　　缺點(diǎn)：設(shè)備昂貴，通量較低。

　　4. 應(yīng)用場(chǎng)景選擇建議?

　　定性檢測(cè)?(如病原體篩查)：普通PCR?。

　　基因表達(dá)分析?：qPCR(相對(duì)定量)?。

　　絕對(duì)定量需求?(如腫瘤基因突變)：dPCR?。

　　總結(jié)?：qPCR是PCR的升級(jí)版，實(shí)現(xiàn)定量分析;dPCR進(jìn)一步突破定量精度限制，但成本更高。選擇時(shí)需權(quán)衡檢測(cè)需求與預(yù)算?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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